噬菌体展示技术——高通量,有内涵

噬菌体展示技术是一种高效基因表达筛选技术,将外源蛋白或多肽与特定的噬菌体衣壳蛋白融合,展示在噬菌体表面并保持相对独立的空间构象和生物活性,有利于靶分子的特异性识别及结合,从而实现基因型和表达型的统一。

噬菌体展示技术因其独特的优势,现已广泛应用于抗原表位分析、单克隆抗体的制备、抗体人源化、药物筛选、疫苗研制以及免疫学疾病诊断、治疗等科学研究领域。

噬菌体技术为啥这么好用?为了一探究竟,我们先来弄清噬菌体是个啥?

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物病毒的总称,因部分能引起宿主菌的裂解,故称为噬菌体。噬菌体主要有双链噬菌体和单链丝状噬菌体两大类,双链噬菌体为λ类噬菌体,单链丝状噬菌体有M13、f1、fd噬菌体。

噬菌体优势

再聊聊噬菌体展示技术——噬菌体技术两大核心:建库和筛选

01噬菌体建库

从B淋巴细胞中扩增抗体的H链和L链基因文库,抗体片段群与噬菌体衣壳蛋白融合表达并展示于噬菌体表面,形成噬菌体展示抗体库。主要有三种类型: scFv库(由VH和VL组成,并由一个小肽(Gly4Ser)3连接成一个单链多肽)、Fab库(含有VH-CH,VL-CL,并由二硫键连接在一起)和VHH库(只有重链可变区)。

噬菌体展示肽库的构建途径:一是有机合成法,二是基因合成法。

噬菌体库的分类

随机肽库:

将化学合成的随机寡核苷酸序列与噬菌体的表面蛋白基因融合,在噬菌体表面表达出各种氨基酸组合的随机序列短肽。利用噬菌体展示随机肽库可以高通量筛选各种抗原的抗原表位。

天然库:

不用免疫动物。抗体均来源于人类,是完全的人源化抗体,但亲和力通常较低。骨髓内和骨髓外所有抗体基因都包含在内,所构建的抗体库适用于所有抗原所对应的抗体的选择,库容量要求较高,最小需要达到109,因为目前估算的自然界的抗原种类在这个数量级上。

免疫库:

免疫库由经过免疫后的供体B 淋巴细胞的抗体基因构建。与天然库相比,从免疫库中能筛选到高亲和力、高特异性的抗体。对于特定免疫抗原的抗体淘选的效率较高,但一般仅适用于一种特异性抗体的选择,库容量要求不高,一般106-108即可满足需求。

02噬菌体筛选

噬菌体抗体库的筛选是关键技术环节,包括两个主要步骤: 淘筛和鉴定。

噬菌体筛选方法

噬菌体筛选流程

>>>> 包被抗原及对照

>>>> bio-panning(3~4轮)

>>>> 多克隆ELISA判定特异富集

>>>> 单克隆ELISA(普健可做高通量96*n)

>>>> 阳性克隆validated ELISA

>>>> 确认克隆测序

>>>> 重组抗体表达

噬菌体展示生物淘选流程

与传统获得抗体技术比较

免疫血清杂交瘤技术噬菌体展示技术抗体形式多克隆抗体单克隆抗体单克隆基因重组宿主细胞N/A杂交瘤E.coli/293/CHO筛选范围N/A~103107-109时间几个月几个月几周操作简单繁杂相对简单免疫必须必须可避免人源抗体否否可以生产量有限有限无限基因获取N/A再克隆直接应用前景有限有限广阔

普健生物可以提供

1噬菌体展示抗体文库的构建(人源,兔源,鼠源,羊驼抗体库)

2噬菌体展示多肽文库的构建

3抗原表位筛选

4抗体亲和力成熟

5抗体人源化

服务特色

1. 建库:经验丰富,可构建多种类型的噬菌体免疫库和天然库(scFv、Fab、VHH等)。

2. 筛选:普健自有噬菌体天然抗体文库,序列正确性高,来源丰富,库容大。

3. 筛选通量高,已成功交付多例建库及筛选项目,客户分布于欧洲及亚洲。

4. 载体带有His标签,可直接用于表达抗体,方便抗体纯化验证。

5. 现已成功开发出兔scFv天然噬菌体文库产品:ATA-Rabbit Naïve ScFv I(库容:1.09×1010 pfu)。

scFv抗体库建库流程图

项目实例

普健生物人源scFv天然噬菌体文库筛选结果
兔重组抗体纯化
DAB染色石蜡切片免疫组化

经兔scFv天然库筛选出的序列,拼接成全长IgG重组抗体表达纯化及功能验证

合肥科生景肽生物科技有限公司成立于2018年,目前已经打造了全球领先的以肽为核心的生命分子发现、合成生产、结构优化、递送平台,主要瞄准肽发现及靶向递送,专注于为各大制药企业、生物技术公司、科研单位提供一站式的定制化研发服务。 公司独有的KPDS™平台(KS-V Peptide Discovery Services Platform)是国际领先的的多肽药物发现平台,我们致力于创新药物的高效和精准开发,以科生景肽专有KPDS技术为核心,提供一站式,定制化的多肽发现服务,以灵活的产品形式和服务模式助力广大客户各类药物发现项目的快速推进和应用探究,包括但并不限于疾病诊断及保健功能产品、多肽药物、核素偶联药物(RDC)、基于小分子的肽药物偶联物(PDC)和多功能肽偶联物等。
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