噬菌体展示技术在新的抗体和多肽发现和优化的过程中扮演着非常重要的作用，它能够和传统的抗体发现平台进行有效的对接，并且被广泛用于抗体、抗体偶联药物和CAR-T/TCR-T等领域。其中用于噬菌体文库构建的高效感受态细胞，是进行该文库构建必要的一种研究工具。达科为独家代理的LGC（Lucigen）提供多种用于噬菌体文库构建的感受态细胞，目前已被广大科研工作者用于新药研发。今天小达君就给大家分享噬菌体展示常用感受态细胞TG1的操作步骤以及实验中的常见问题。
感受态细胞基因型
TG1: [F´traD36 proAB lacIqZ ΔM15] supE thi-1 Δ(lac-proAB) Δ(mcrB-hsdSM)5(rK– mK–)
SS320 (MC1061F´): [FproAB+ lacIq lacZΔM15 Tn10 (tetr)]hsdR mcrB araD139 Δ(araABC-leu)7679ΔlacX74 galUgalK rpsL thi
ER2738: [F´proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (tetr)] fhuA2 glnVΔ(lac-proAB) thi-1Δ(hsdS-mcrB)5
转化实验准备工作
转化实验在0.1cm的电转杯中进行，每个反应需要25μl感受态细胞。下表列出了电穿孔实验的优化设置。标准的时间常数是3.5到4.5 msec。
推荐的电转系统
Bio-Rad Micro Pulser #165-2100; Bio-Rad E. coli Pulser #165-2102; Bio-Rad Gene Pulser II #165-2105; BTX ECM630 Electroporation System; Eppendorf Electroporator 2510.
阳性对照
可使用1μl试剂盒中提供的超螺旋pUC19 DNA（10 pg/μL）进行电转对照。
转化注意事项
连接反应产物在转化之前在70ºC热灭活15min，连接产物在热灭活后无需纯化可直接使用；
DNA样本必须是溶解于ddH2O或TE buffer的纯化样本。电转化样本中如果存在盐离子会导致电转过程中的高压电弧，从而引起细胞和DNA的损失；
微量离心管和电转杯在使用前必须冰浴，我们测试过BTX (Model 610), Eppendorf；
感受态细胞在使用之前必须在冰上解冻；
为了得到高效的转化效率，请使用试剂盒中的Recovery Medium重悬电转后的细胞，如果使用TB或其它培养基会降低感受态的转化效率；
电转后的细胞可以在LB或其它常规培养基上涂板。
实验操作步骤
准备17 mm x 100 mm无菌管（一个转化反应一只无菌管），将Recovery Medium和恢复到室温。使用SOC或其它培养基可能会降低转化效率。
将电转杯(0.1 cm gap) 和微量离心管至于冰上。
从-80℃冰箱取出电转感受态细胞，放置在冰盒中直至完全融化（10-15min）。
当细胞溶解完全后，轻轻拍打混匀。取出25µl细胞至置于冰上的预冷微量离心管中。（建议一管感受态细胞一次使用完，如果一次只用25µl，剩下的一半请立即放回-80℃冰箱）。
如果使用任何一款Lucigen克隆或连接试剂盒的连接Buffer，取1µl热灭活的连接产物到25µl的细胞中（没有进行热灭活的连接产物会抑制转化反应），用枪头轻轻搅动；不要上下吹打混匀，这样会产生气泡并使细胞升温。使用2µl以上的连接产物会引起电转过程中的电弧。
轻轻的将25µl细胞/DNA混合物转移至预冷的电转杯中，注意避免产生气泡。用手指快速地将试管向下轻弹，使细胞沉积在井电转杯的底部。根据以上推荐的电转条件进行电转。
在脉冲10s内，加975µl的Recovery Medium到电转杯，用枪上下吹打3次重悬细胞，然后将含有细胞的培养基转移到无菌培养管中。
将培养管放在摇床上，250rpm转速，37℃培养1h。
从培养管中取100µl转化后的细胞涂布于含特定抗生素的LB（或其他培养基）琼脂糖平板上。
将该培养板置于37℃过夜培养。
转化后生长的克隆可以在TB或其他营养的培养基中进一步生长。
培养基配方
LB Lennox Agar Plates（每L配方）
10 g tryptone
5 g yeast extract
5 g NaCl
15 g agar
Medium for Growth of Transformants
LB Miller（每L配方）
10 g tryptone
5 g yeast extract
10 g NaCl
TB（每L配方）
11.8 g tryptone
23.6 g yeast extract
9.4 g 磷酸氢二甲(无水)
2.2 g 磷酸二氢钾 (无水)
0.4% glycerol
将所有组分加到去离子水中，用NaOH调节pH到7.0。高压灭菌然后冷却到55 °C。
*LB Lennox Agar用于最大限度地扩大菌落大小。感受态细胞也可以涂布于LB或其它常规的培养基上，但是克隆菌落的大小会相对来说小一点，但是也足以满足绝大多数的实验目的。
常见问题
1. 使用不同的电转杯（1mm/2mm），感受态细胞的使用体积是多少？
答：根据说明书的建议，1mm电转杯一个反应使用25µl感受态细胞，如果一次反应体积超过50µl，建议使用2mm电转杯。
2、在一个转化反应中，DNA/Ligation产物加入的最大体积和量是多少？
答：DNA/Ligation产物最大的加入体积为使用感受态细胞体积的1/10；而关于DNA/Ligation产物最大加入量则需要考虑诸多因素，如样本中盐离子、PEG等的含量，如果以试剂盒中阳性对照pUC19 DNA（10 pg/μL）为例，建议最大加入量为20pg。
3、转化效率的计算方法？
答：目前最常用的方法是计算每微克DNA经转化后可以得到的阳性克隆菌落的数目(clone formation unit, cfu)。假设取10pg pUC19质粒进行转化，加入培养基后终体积为1ml（此时DNA浓度为10pg DNA/ml。然后用培养基进行1:10稀释（此时DNA浓度变为1pg DNA/ml），分别取100μl（含总量为0.1pg的DNA）涂布至两个平行的平板中。如果最后产生的菌落数为200个（两个平板菌落的平均数），则转化效率为：
200 cfu/0.0001ng = 2×109 cfu/μg
4、感受态细胞是否能提供试用装？
答：可以的
噬菌体文库构建感受态细胞介绍
抗体或多肽噬菌体展示库构建的最佳选择；
最高转化效率的TG1感受态细胞，转化效率≧4×1010 cfu/μg；
具有琥珀和非琥珀抑制基因的灵活性选择；
生成更大的基因文库，加速研究发现。
* IPTG induction required
*以上感受态细胞特别适用于噬菌体展示蛋白表达,也适用于M13噬菌体、常规克隆、蓝/白筛选和蛋白表达。
相关产品信息
科生景肽生物科技有限公司成立于2018年，目前已经打造了全球领先的以肽为核心的生命分子发现、合成生产、结构优化、递送平台，主要瞄准肽发现及靶向递送，专注于为各大制药企业、生物技术公司、科研单位提供一站式的定制化研发服务。
公司独有的KPDS™平台(KS-V Peptide Discovery Services Platform)是国际领先的的多肽药物发现平台，我们致力于创新药物的高效和精准开发，以科生景肽专有KPDS技术为核心，提供一站式，定制化的多肽发现服务，以灵活的产品形式和服务模式助力广大客户各类药物发现项目的快速推进和应用探究，包括但并不限于疾病诊断及保健功能产品、多肽药物、核素偶联药物(RDC)、基于小分子的肽药物偶联物（PDC)和多功能肽偶联物等。
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合肥科生景肽生物科技有限公司成立于2018年，目前已经打造了全球领先的以肽为核心的生命分子发现、合成生产、结构优化、递送平台，主要瞄准肽发现及靶向递送，专注于为各大制药企业、生物技术公司、科研单位提供一站式的定制化研发服务。 公司独有的KPDS™平台(KS-V Peptide Discovery Services Platform)是国际领先的的多肽药物发现平台，我们致力于创新药物的高效和精准开发，以科生景肽专有KPDS技术为核心，提供一站式，定制化的多肽发现服务，以灵活的产品形式和服务模式助力广大客户各类药物发现项目的快速推进和应用探究，包括但并不限于疾病诊断及保健功能产品、多肽药物、核素偶联药物(RDC)、基于小分子的肽药物偶联物（PDC)和多功能肽偶联物等。 中文官网地址：https://www.ks-vpeptide.com.cn/ 英文官网地址：https://www.ks-vpeptide.com
