一、转盐与脱盐的定义及目的
1.转盐
将多肽从一种盐形式（如三氟乙酸盐TFA）转换为其他盐形式（如醋酸盐、盐酸盐），主要目的包括：
1）提高纯度：去除合成残留的TFA等杂质。
2）改善溶解性：钠盐（Na⁺）可增加亲水性，提升水溶性。
3）增强稳定性：醋酸盐（AC）的细胞毒性低于TFA，适用于药物肽。
4）适配后续应用：如缓释制剂中需使用双羟萘酸盐。
2.脱盐
去除多肽溶液中的小分子盐类（如硫酸铵、TFA）及杂质，目的包括：
1）避免盐分干扰下游实验（如质谱分析、生物活性测定）
2）减少细胞毒性（如TFA残留对细胞实验的影响）
二、技术方法及原理
（一）转盐工艺
1.离子交换法
1）原理：基于多肽与树脂间的电荷相互作用，通过改变缓冲液的pH或离子强度实现盐形式转换
2）关键设备：强阳离子交换柱（如磺酸基修饰的树脂）
3）参数优化：流动相pH范围（酸性条件下保留正电性多肽）、醋酸铵浓度梯度
2.HPLC法
1）反相HPLC：利用疏水作用分离，TFA作为离子对试剂增强保留，转盐时替换为醋酸等挥发性酸
2）离子交换HPLC：直接通过电荷差异分离，适用于大规模制备
（二）脱盐工艺
1.凝胶过滤色谱（分子排阻色谱）
1）原理：基于分子大小差异，小分子盐类快速通过凝胶孔隙，多肽因体积较大被延迟洗脱
2）典型填料：葡聚糖凝胶G25
2.透析法
操作：将多肽溶液置于半透膜内，通过扩散去除盐分
局限：耗时长（需数小时至数天），盐残留较高
3.超滤法
技术优势：快速（数分钟至数小时），适用于大体积样品
膜选择：截留分子量需低于多肽分子量1/3
4.自动化工作站（如Opentrons OT-2）
流程：自动移液→分配至透析袋或层析柱→实时监测洗脱
优势：高通量、高重复性，减少人为误差
三、关键影响因素
1.盐类型与多肽性质
TFA盐虽普遍但具有细胞毒性，药物肽需转换为醋酸盐或双羟萘酸盐。
铵盐（NH₄⁺）易导致多肽聚集，需根据序列电荷特性谨慎选择。
2.pH与离子强度
酸性多肽在碱性缓冲液中溶解性更佳，需调整pH至等电点附近。
TFA浓度需控制在0.05-0.1%，过高会损伤HPLC柱。
3.多肽分子特性
疏水性多肽需先溶于有机溶剂（如乙腈），再逐步转盐至水相。
含二硫键或多修饰多肽需避免强氧化/还原环境。
四、典型应用案例
1.药物肽的醋酸盐转换
案例：GLP-1类似物（如利拉鲁肽）需从TFA盐转为醋酸盐以降低毒性。
方法：离子交换柱（SP Sepharose）结合醋酸铵梯度洗脱。
2.缓释制剂的双羟萘酸盐制备
案例：奥曲肽缓释微球采用双羟萘酸盐提升药物释放稳定性。
工艺：反相HPLC纯化后，与双羟萘酸共沉淀。
3.细胞实验前的脱盐处理
需求：去除TFA以避免抑制细胞增殖。
方案：G25凝胶柱快速脱盐，耗时<30分钟。
五、工艺优化建议
1.转盐/脱盐顺序：优先脱盐再转盐，避免盐竞争干扰离子交换
2.分析方法验证：质谱确认盐形式转换，HPLC检测纯度>95%
3.成本控制：小规模研究首选透析法，大规模生产采用自动化工作站
总结：多肽转盐/脱盐工艺的选择需综合考虑目标盐形式、多肽特性及下游应用场景，结合实验条件进行优化。返回搜狐，查看更多
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