治疗性抗体的发展经历了鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体等多个阶段。全人源抗体的氨基酸序列100%来自人类，因此具有免疫原性更低，安全性更好的优势。噬菌体展示技术为全人源抗体的制备提供了良好的技术平台，已成为目前获得全人源抗体的主要手段之一。
金斯瑞蓬勃生物成功独立开发了全人天然文库，严格质控且具有不同遗传背景的健康外籍人PBMC作为基因来源，用一套完整多样的全人抗体基因家族特异性引物进行抗体片段扩增，以Fab形式构建在可进行可溶性表达的phagemid中。库容达1.0×1011，并在持续扩容中，很好的覆盖了人类抗体基因的多样性。
文库特点：
选取超过1000个健康外籍供体，总库容1.0×1011 ，在持续扩展库容的同时持续保证文库的合规性。
供体来自白人、黑人、黄种人三个种族，男女两种性别，A±、B± 、O± 、AB± 8种血型，保证了文库样本的多样性。
图1. 供体种姓及血型分布图
抗体基因种系频率分布与IMGT数据库相似，CDR3长度分布合理。文库QC:插入率>95%，入框率>85%，序列多样性>95%。
针对噬菌体展示文库的抗体发现流程，会先通过多轮文库淘选(固相，液相，细胞及定制组合淘选策略等)及ELISA及FACS筛选(结合，阻断，内化活性等)获得符合要求的阳性克隆，并进一步会在纯化抗体层面进行亲和力及体内外功能活性测定，最终获得最优的功能性全人源抗体先导分子。
我们将以靶向CLDN18.2和靶向PD-L1的先导分子发现为例展示金斯瑞蓬勃生物全人天然文库的能力。
案例展示1——靶向CLDN18.2的全人抗体发现
使用金斯瑞蓬勃生物全人天然噬菌体展示文库进行蛋白和细胞交叉淘选及FACS细胞抗体单克隆结合活性筛选后获得大于300个阳性克隆，经Sanger测序后共获得85个阳性单克隆用于后续优势先导分子的选择。随机选择11个分子进行真核表达纯化获得纯化抗体样品，纯化抗体的亲和力检测和功能活性验证结果显示，除额外两个表达较差且不结合的克隆外，9株纯化抗体的在蛋白及细胞结合活性，ADCC&CDC功能活性上均与阳参抗体IMA362相当或更好，具体结果展示如下：
图2.靶向CLDN18.2的功能性全人先导分子发现流程图
1、筛选分子均结合人源和鼠源CLDN18.2细胞，种属交叉活性较好，但不与家族同源分子CLDN18.1结合。
图3.纯化抗体的细胞结合活性
2、9株抗体与人源CLDN18.2的结合表位与阳参一致。
图4.纯化抗体的表位鉴定
3、9株抗体的亲和力达到nM水平，均高于阳参IMAB362。图5.纯化抗体的亲和力检测数据及部分检测图
4、9株抗体对于靶细胞的ADCC及CDC杀伤活性均与阳参抗体相当。
图6.纯化抗体的杀伤功能活性检测
总结：在靶向靶向CLDN18.2的功能性全人发现项目中，当前筛选得到分子在亲和力，种属交叉，结合表位及体外杀伤方面优于或与阳参相当，后续进一步的功能性验证或单抗分子的应用在进一步测试中，敬请期待。
案例展示2——靶向PD-L1的全人抗体发现
使用金斯瑞蓬勃生物全人天然噬菌体展示文库，成功筛选出靶向PD-L1的全人抗体，从中挑选4个最优的抗体先导分子构建全长抗体，纯化抗体的亲和力检测和功能活性验证结果显示：4株抗体与不同种属的PD-L1细胞均具有较好的结合活性，并且抗体的亲和力达到nM水平；其中3株抗体针对PD-1/PD-L1的阻断活性优于或与阳参相当。具体结果展示如下：
1、4株抗体均结合人源、猴源和鼠源PD-L1细胞，种属交叉活性较好。图7.纯化抗体的细胞结合活性
2、4株抗体和人源PD-L1的结合表位与两种阳参一致。
图8.纯化抗体的表位鉴定
3、4株抗体的亲和力达到nM水平，且有2株抗体的亲和力与阳参Avelumab相当。
图9.纯化抗体的亲和力检测数据及检测图
4、4株抗体中，有3株抗体展现了和对照抗体相当、甚至更优的阻断活性。图10.纯化抗体的阻断活性检测
选择使用全人天然文库与其他抗体发现技术路线同时进行抗体发现，全人天然文库的淘选和筛选部分费用免费
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关于金斯瑞蓬勃生物金斯瑞子公司金斯瑞蓬勃生物(GenScript ProBio)拥有一站式生物药研发生产平台，主要致力于为细胞和基因治疗(CGT)药物、疫苗及抗体蛋白药物等提供从靶点开发到商业化生产的端到端CDMO服务。金斯瑞蓬勃生物在美国、荷兰、韩国、上海、香港、南京等地设有公司以服务全球客户。自2017年10月，共助力美国、欧洲、亚太等区域客户获得超过50个IND批件。
金斯瑞蓬勃生物的细胞和基因治疗整体解决方案涵盖了非注册临床、工艺开发，注册临床和商业化全阶段质粒病毒生产。金斯瑞蓬勃生物的生物药开发解决方案涵盖生物药尤其是抗体药发现、抗体工程和抗体评价。在生物药CDMO服务方面，金斯瑞蓬勃生物为客户提供包括细胞系开发、宿主细胞商业化授权、上下游工艺开发、分析方法开发和临床样品及商业化生产等在内的一体化CDMO服务，并提供分批补料和灌流工艺以满足增长的抗体蛋白药的需求。GMP生产车间满足FDA、EMA和NMPA监管要求。
金斯瑞蓬勃生物始终以“合作加速创新”为理念，致力于帮助客户缩短生物药进入临床的时间，显著降低客户的研发成本，加速医药转化，共创健康未来。
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