多肽合成的基本步骤

1.多肽合成的基本原理?

多肽固相合成法是多肽合成化学的一个重大的突破。它的最大特点是不必纯化

中间产物,合成过程可以连续进行,进而为多肽合成的自动化奠定了基础。目

前全自动多肽的合成,基本都是固相合成。其基本过程如下:

基于Fmoc化学合成,先将所要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键

形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这一氨基酸的氨基作为 多肽合成

的起点,同其它的氨基酸已经活化的羧基作用形成肽键,不断重复这一过程,

即可得到多肽。根据多肽的氨基酸组成不同,多肽后处理方式不同,纯化方式

也有差异。

2.做免疫用的多肽多长为合适?

答:一般约10- 15个氨基酸,当然长- – 些免疫效果好一些,不过合成费用也会

增加。MAP 多肽则希望长度在15aa以上,效果较好。另外,10aa 以下的多肽

免疫效果比较差。

3.免疫用多肽的纯度需要很高吗?

答:一般而言,免疫用Peptide,70- 85%即可。

4.我们合成的多肽溶解性不好,多肽就有问题对吗?

答:很难准确预测-一个多肽的溶解性及合适的溶剂是什么。如果多肽难以溶解

就认为多肽合成有问题这个观念并不正确。

5.多肽状态是如何?如何保存储存?

答:我们提供的多肽是粉末状,一般为灰白色,组成不同,多肽粉末的颜色有

差异,多肽一般长期保存需要避光保存,并应保存在-20度,短期可以保存在

4度。可以短时间的话是以室温运输。

6.如何溶解多肽?

答:溶解多肽是非常复杂的事情,一般很难一下子确定合适的溶剂。通常是先

取一点试验,在没有确定合适的溶剂前千万不要合部溶解。

下列方法有助于您选择合适的溶剂:

(1)判定多肽的电荷特定,设定酸性氨基酸Asp(),Glu(E)和C端C00H为-1;

碱性氨基酸Lys(K), Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它氨基酸的电荷为0。

计算出将电荷数。

(2)如果净电荷数>0,多肽为碱性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加

入醋酸(10%以上);如果多肽还不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入

500ul水稀释。

(3)如果净电荷数<0,多肽为酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加

入氨水(25u1)溶解,然后加入500ul水稀释。

(4)如果净电荷数=0,多肽为中性,一般需要用有机溶剂如乙腈,甲醇或异丙

醇,DMSO等溶解。还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的多肽。

7.非 HPLC纯化的多肽中有哪些杂质?

答:粗品和脱盐级别的多肽中多肽和非多肽类杂质:如非全长多肽和多肽后处理的一些原料如DTT、TFA等。

8.HPLC纯化的多肽有哪些杂质?

答:经过 HPLC纯化的多肽,仍会有一些一些杂质存在,其中的杂质主要是短肽和微量TFA。

9.多长的多肽为合适?

答:多肽合成需要考虑多肽的长度,电荷,亲疏水性等因素。长度越长,合成粗品的纯度和产率都随着降低,纯化的难度和无法合成的几率就会大些。当然多肽功能区的序列是无法改变的,但是为了多肽的顺利合成,有时不得不在功能取的上下游增加一些辅助氨基酸,以改善多肽的溶解性和亲疏水性。如果多肽太短,合成也可能有问题,主要问题是合成的多肽在后处理过程中有一定的难度,5肽以下的多肽,一般要有疏水的氨基酸,否则后处理难度加大。15个氨基酸残基以下的多肽一般都可以得到满意的产率和得率。

10.如何从多肽序列中判定多肽的溶解性?

(1)多肽中如果含有高比例的疏水性很强的氨基酸如和 Leu,Val,IIe,Met, Phe和 Trp,多肽很难溶解与水性溶液中或根本不可能溶解。这些氨基酸无论是纯化或合成,都有可能有问题。

(2)一般情况下疏水性氨基酸的比例<50%,不能连续5个连续aa为疏水性,带电荷的氨基酸的(正电荷K,R,H,N-terminus,负电荷D,E,C- terminus)的比例达到20%,在多肽的Ⅳ或C短如果能增加极性氨基酸,也可以改善溶解性。合肥合生生物

合肥科生景肽生物科技有限公司成立于2018年,目前已经打造了全球领先的以肽为核心的生命分子发现、合成生产、结构优化、递送平台,主要瞄准肽发现及靶向递送,专注于为各大制药企业、生物技术公司、科研单位提供一站式的定制化研发服务。 公司独有的KPDS™平台(KS-V Peptide Discovery Services Platform)是国际领先的的多肽药物发现平台,我们致力于创新药物的高效和精准开发,以科生景肽专有KPDS技术为核心,提供一站式,定制化的多肽发现服务,以灵活的产品形式和服务模式助力广大客户各类药物发现项目的快速推进和应用探究,包括但并不限于疾病诊断及保健功能产品、多肽药物、核素偶联药物(RDC)、基于小分子的肽药物偶联物(PDC)和多功能肽偶联物等。
中文官网地址:https://www.ks-vpeptide.com.cn/
英文官网地址:https://www.ks-vpeptide.com
© 版权声明
THE END
喜欢就支持一下吧
点赞9 分享
评论 抢沙发
头像
欢迎您留下宝贵的见解!
提交
头像

昵称

取消
昵称表情代码图片