原标题：美容多肽芋螺抗皱素的产品特性与合成
芋螺抗皱素，又名芋螺毒素等，英文名为mu‑conotoxin，具体肽序如下：H‑Pyr‑Gly‑Cys‑Cys‑Asn‑Gly‑Pro‑Lys‑Gly‑Cys‑Ser‑Ser‑Lys‑Trp‑Cys‑Arg‑Asp‑His‑Ala‑Arg‑Cys‑Cys‑NH2(Disulfide Bridge:3‑15,4‑21；10‑22)。芋螺抗皱素属于u‑芋螺毒素家族，最早从海洋腹足类软体动物芋螺毒液中分离得到，靶向多种电压敏感性钠通道，主要阻断Nav1.4通道，选择性高、副作用小。
芋螺抗皱素原料图
芋螺抗皱素主链氨基酸有22个，其肽链较长且有三对二硫键形成其特定的空间立体结构。一般为含有10‑30个氨基酸残基的小肽，绝大多数CTX分子内含有3对二硫键，是一类高度折叠的胜肽，穿透能力强，可以针对肌肉达到放松的作用。芋螺毒素肽按其二硫键的连接方式信号肽序列等结构特征研究发现，芋螺抗皱素可以通过抑制钠离子通道、钙离子通道以及乙酰胆碱受体，从而阻断神经信号传递抑制肌肉收缩，最终达到减少皱纹的效果。芋螺抗皱素可消除人面部上的表情皮肤皱纹，被用于化妆品领域。
产品特性
芋螺抗皱素是一种经过排序、人工合成的生物制品，模拟芋螺毒素，具有非常强效的肌肉松弛作用，可以使使用者感受到迅速即时的抗皱效果，广泛应用于抗皱产品中。芋螺毒素是高度折叠的胜肽，强力穿透，高稳定性，目标性的针对肌肉达到放松的作用。由阻断神经肌肉的电流传导进而瞬间淡化皱纹，使肌肤回春看起来更年轻。
合成方法
（1）合成片段肽S1‑S5
Pyr‑Gly‑Cys(Mob)‑Cys(Trt)‑Asn(Trt)‑OH；第一个氨基酸的偶联：于500ml反应烧瓶中，加入27.8g CTC Resin(取代度1.08mmol/g，30mmol)、17.9g Fmoc‑Asn(Trt)‑OH(30mmol)和300mL二氯甲烷，搅拌至氨基酸完全溶解；搅拌条件下，向反应烧瓶中缓慢滴加入16mL DIPEA(90mmol，11.6g)。滴加完毕，水浴加热，定温T内＝30±3℃，反应5h。
肽树脂封端：量取30mL甲醇，搅拌条件下，缓慢加入到反应烧瓶中，反应温度T内＝30±3℃，反应0.5h。反应结束后，抽滤，肽树脂用300ml DMF洗涤4次，每次抽干，得到Fmoc‑Asn(Trt)‑CTC Resin。
芋螺抗皱素MS图
（2）片段肽S1‑S5肽链延长反应
肽树脂N端氨基去保护：将肽树脂转移到合适的固相反应器中，向固相反应器中加入300ml去保护液1(20％ PIP，溶剂DMF)，打开N2阀门，开始反应，反应温度T内＝30±3℃，反应0.5h。反应结束后，抽滤，肽树脂用300mL DMF洗涤6次，每次抽干。取样做NT检测，检测结果为阳性。
偶联氨基酸：预活化：称取氨基酸(30mmol)和HOBt(30mmol)，加入到活化瓶中，并加入300ml DMF，搅拌溶清。冰水浴控温T内＝5±5℃，继续加入DIC(30mmol)，维持温度，活化5‑10min。偶联：活化完成后，将活化液加入到固相反应器中，打开N2阀门，开始反应，反应温度T内＝30±3℃。反应2h后开始取样进行NT检测，NT检测呈阴性后，停止反应，抽滤，肽树脂用300ml DMF洗涤4次，每次抽干。得到肽树脂Fmoc‑Asn(Trt)‑CTC Resin。
片段肽S1‑S5肽树脂延长反应得到：Pyr‑Gly‑Cys(Mob)‑Cys(Trt)‑Asn(Trt)‑CTC Resin。片段肽S1‑S5肽树脂收缩：肽树脂依次用300mL甲基叔丁基醚洗涤2次，每次抽干；用300mL二氯甲烷洗涤2次，每次抽干；再用300mL甲基叔丁基醚洗涤2次，每次抽干。得到肽树脂63.7g。
片段肽S1‑S5肽树脂裂解：于1000mL裂解瓶中，加入裂解液(20％TFE in DCM)，并缓慢加入肽树脂Pyr‑Gly‑Cys(Mob)‑Cys(Trt)‑Asn(Trt)‑CTC Resin，水浴加热，定温T内＝30±3℃，开始反应。裂解2‑3h后，停止反应，过滤，滤饼用二氯甲烷淋洗，收集全部滤液，30±3℃减压浓缩，浓缩残渣用甲基叔丁基醚打浆，过滤，淋洗，烘干，纯化，得到S1‑S5精品31.5g(28.3mmol)，总收率94.3％。
（3）芋螺抗皱素的合成
树脂溶胀：向固相反应器中，加入25.0g Rink Amide‑AM Resin(取代度：0.40mmol/g；10mmol)和250mL DMF，调节温度至T内＝30±3℃，溶胀1‑2h。溶胀结束后抽滤，并用250ml DMF洗涤2次，每次抽干。
（4）第一个氨基酸的偶联
树脂脱保护：向固相反应器中加入250mL去保护液1(20％ PIP/80％DMF)，打开N2阀门，调节温度至T内＝30±3℃，反应0.5h。反应结束后抽滤，并用250mL DMF洗涤6次，每次抽干；最后两次洗涤后，用广泛pH试纸检测滤液pH值，最后一次洗涤滤液pH＝7左右。取样进行NT检测，检测结果为阳性。
预活化：向活化瓶中加入12.4g Fmoc‑Cys(Acm)‑OH(30mmol)和4.1gHOBT(30mmol)，再加入250mL DMF搅拌溶清。控温至T内＝5±5℃，加入4.8mL DIC(3.8g，30mmol)，缓慢搅拌活化10±5min。
偶联：将上述活化液加入到固相反应器中，打开N2阀门，调节温度至T内＝30±3℃，开始反应。反应2h后开始取样进行NT检测，NT检测呈阴性后，停止反应，抽滤，肽树脂用250ml DMF洗涤4次，每次抽干。得到肽树脂Fmoc‑Cys(Acm)‑Rink Amide‑AM Resin。
芋螺抗皱素HPLC图
（5）芋螺抗皱素肽链延长反应
肽树脂N端氨基去保护：向固相反应器中加入250ml去保护液1(20％PIP，溶剂DMF)，打开N2阀门，开始反应，反应温度T内＝30±3℃，反应0.5h。反应结束后抽滤，并用250mL DMF洗涤6次，每次抽干；最后两次洗涤后，用广泛pH试纸检测滤液pH值，最后一次洗涤滤液p H＝7左右。取样进行NT检测，检测结果为阳性。
偶联氨基酸或肽段：预活化：称取氨基酸或肽段和HOBt，加入到活化瓶中，并加入N,N‑二甲基甲酰胺，搅拌溶清。冰水浴控温T内＝5±5℃，继续加入DIC，维持温度，活化5‑10min。偶联：活化完成后，将活化液加入到固相反应器中，打开N2阀门，开始反应。反应2h取样进行NT检测，NT检测呈阴性后，停止反应，抽滤，肽树脂用DMF洗涤4次，每次抽干，芋螺抗皱素的合成路线下图所示。
芋螺抗皱素的合成路线
芋螺抗皱素肽链延长反应，合成得到Pyr‑Gly‑Cys(Mob)‑Cys(Trt)‑Asn(Trt)‑Gly‑Pro‑Lys(Boc)‑Gly‑Cys(Acm)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Trp(Boc)‑Cys(Mob)‑Arg(Pbf)‑Asp(OtBu)‑His(Trt)‑Ala‑Arg(Pbf)‑Cys(Trt)‑Cys (Acm)‑Rink Amide‑AM Resin。返回搜狐，查看更多
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