Cre-LoxP系统验证
——质粒转染
背景介绍
Cre是一种在噬菌体中发现的重组酶，能够识别特异性位点（LoxP），使2个LoxP位点之间的DNA序列发生精确重组。LoxP位点是噬菌体中长度为34bp的回文结构序列，具有方向性，LoxP的方向影响DNA重组的结果。目前已发现多种LoxP位点，均可被Cre酶识别。Cre-LoxP系统经常被用于化学遗传激活和基因敲除领域。
DIO-mCherry质粒是基于Cre重组酶活性报告质粒。该质粒包含CAG启动子、正向LoxP、正向LoxP 2272、反向mCherry、反向LoxP、反向LoxP 2272、WPRE等结构。在Cre重组酶的作用下，反向mCherry序列会发生翻转，进而正常翻译mCherry红色荧光蛋白（见图1）。
图1. Cre-LoxP系统序列翻转示意图
实验方法
1、将肝癌Huh7细胞接种于12孔板中；
2、将DIO-mCherry（质粒A）、pLVX-EGFP-CRE（质粒B）、pAAV-EGFP-CRE（质粒C）单独或组合转染至细胞中，质粒单转条件为1μg质粒+2μL转染试剂，质粒双转条件为各1μg质粒+3μL转染试剂；
3、转染48h后，在荧光显微镜下观察。
结果展示
4组和5组可以观察到红色荧光，表明CRE酶在细胞中发挥作用，将反向mCherry基因序列翻转，从而正常表达（见图2）。
图2. 细胞荧光图
结论
1、本公司的CRE慢病毒载体和CRE腺相关病毒载体可以表达高效CRE酶。
2、OriTrans® DNA转染试剂可开展双质粒共转染实验。
慢病毒颗粒和AAV病毒颗粒感染细胞的实例将在后续推出。
讴睿
公司简介|
湖南讴睿生物科技有限公司（Ori-Bio）成立于2017年，目前已发展为专业从事生物科技服务和前沿技术研发的高新技术企业，多年来深耕细作，为生命科学和医学研究人员提供专业产品和服务。讴睿生物始终以客户需求为导向，将客户体验放在首位，将严谨贯穿科研始末，欢迎广大客户前来咨询。产品介绍|2024年，讴睿生物成立了专业子品牌Ori Trans，专注于细胞和动物的基因递送领域，提供质粒构建、转染试剂、病毒包装、稳转细胞株构建、基因编辑细胞株构建等技术服务及相关产品，可为客户提供大量现货载体和一站式定制服务。以上CRE慢病毒载体、CRE腺相关病毒载体和OriTrans® DNA转染试剂均来源于湖南讴睿生物科技有限公司（Ori-Bio）。如需病毒载体可添加下方客服微信咨询详情，如需转染试剂试用装请扫描下方二维码填写申请表领取。扫码领取试用装
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